洗潔精對人皮膚纖維細胞損傷刺激的研究

李梅¹，郭洪砷¹，黃曉明¹，張進²

(1．安利(中國)研發中心，上海200021;2．復旦大學上海醫學院，上海200032)

摘要：借助人體皮膚纖維細胞損傷刺激實驗，通過MTT顯色圖和細胞結晶紫染色圖分析了洗潔精對人體皮膚的影響。

關鍵詞：洗潔精；皮膚；刺激性；人皮膚成纖維

中圖分類號：TQ649    文獻標識碼：A    文章編號：1006-7264( 2010)11-0029-02

洗潔精為日常消費用品。安利公司生產的濃縮型洗潔精是一種高效的去污和去油產品。它可以應用于所有餐具以及水果蔬菜的清洗，專利的“三元洗滌系統”（融合3種特殊的表面活性劑，迅速溶解頑固污垢）使其溶解污垢的效果奇佳。作為一種生活中常用的消費品，洗潔精的使用安全性也是大家關注的問題之一。安利濃縮型洗潔精含有蘆薈和椰子油衍生物，性質溫和，使用中可起到保護雙手的功效。本實驗將以人體皮膚成纖維細胞作為模型，對比分析安利濃縮型洗潔精對皮膚的影響。

1實驗材料與方法

1.1材料

人皮膚成纖維細胞為原代培養細胞，上海肯強儀器有限公司；MTT [3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽]，sigma公司；其他試劑均國產。

1.2人皮膚成纖維細胞培養

早代人皮膚成纖維細胞，上海肯強儀器有限公司；5％（體積分數）CO₂培養，培養基為含有10％（體積分數）胎牛血清的高糖DMEM(購自Gibco)；傳代消化使用0.1％胰酶。

1.3對人皮膚成纖維細胞的刺激

使用安利公司的濃縮型洗潔精以及其他公司同類產品B和D，以刺激體積分數為0.200％為基準，按照同等去污力原則稀釋安利濃縮洗潔精，得到4個不同濃度樣品(Al，A2，A3和A4)。將早代人皮膚成纖維消化后傳于96孔板中(每孔5.0×l04個細胞，第2天細胞密度約為80％)。吸棄培液后，分別加入各濃度洗潔精稀釋液100μL，作用5min后，吸棄稀釋液，加入100μL DMEM完全培液，24 h后測定MTT值。或使用各稀釋液作用12 h后，直接鏡下或結晶紫染色后觀測細胞形態。

1.4 MTT檢測

每孔(含有100μL DMEM)加入10μL MTT反應液(質量濃度為5g／L，溶于磷酸鹽緩沖液PBS)，置于CO₂培養箱中，4h后棄培液，加入100μL DMSO（二甲基亞砜），避光溫和搖動20 min后，使用Spectra Max M5多功能酶標儀測OD490吸光值。

1.5結晶紫染色

吸棄培液，PBS洗一遍，冰上甲醇固定2 min，加入質量濃度為0.2 g／L的結晶紫染液固定細胞15 min，吸棄染液，用蒸餾水洗細胞3次，可見光下觀察細胞狀態。

2試驗結果及討論

各稀釋液短時間作用于人皮膚成纖維細胞5 min，24 h后使用MTT檢測細胞（見圖1），以分析短時間作用，對皮膚成纖維細胞活力的影響。對細胞存活率的檢測結果顯示，與同類產品B和D對比，安利濃縮洗潔精同等去污力樣品，對細胞活力的影響明顯弱很多。這表明，與其他品牌洗滌劑相比，在同等去污力并短時間刺激條件下，安利洗潔精對皮膚成纖維細胞的損失明顯弱很多。其中，稀釋液A4樣品幾乎對細胞無損傷（圖2）。

為了分析較長時間對皮膚成纖維細胞的作用，試驗分別使用各稀釋液較長時間作用于細胞12 h。作用后發現，同類產品引起皮膚成纖維細胞大面積死亡（見圖3）。

進一步細胞結晶紫染色顯示相同結果（見圖4）。洗潔精是日常用品，在對高效去污去垢效能的同時，其對皮膚的刺激性也為廣大消費者所關心。為此，對比其他同類產品，檢測了安利濃縮洗潔精在短時間和長時間兩種作用方式下，對皮膚成纖維細胞的影響。

結果顯示，在同等去污能力下，安利濃縮洗潔精對皮膚成纖維細胞的影響明顯小于其他同類產品。而在較長時間的作用下，安利濃縮洗潔精對皮膚成纖維細胞的低損傷作用進一步顯示出來，例如安利洗潔精A3稀釋液長時間對細胞幾乎沒有損傷作用。